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UK Health Security Agency

Mode d'emploi pour l'ouverture des ampoules en verre de NCTC et la reconstitution du contenu lyophilisé

Pour plus de détails sur les produits, veuillez vous référer à la fiche de données de sécurité et au certificat d'analyse respectifs.

 

 

  1. À leur réception, conservez les ampoules entre 4 °C ± 10 °C.

  2. Recommandations de sécurité : Les ampoules d'AGENTS PATHOGÈNES DANGEREUX (Conditions of Supply of microbial pathogens: Safety) doivent être ouvertes selon un niveau de confinement adapté, tel que défini par le Comité consultatif sur les agents pathogènes dangereux, et dans un poste de sécurité microbiologique conçu pour protéger l'employé contre l'inhalation d'aérosols (au Royaume-Uni, un poste de classe I, de classe II ou de classe III).

  1. Identifiez la culture à l'aide du numéro inscrit sur le papier à l'intérieur ou à l'extérieur de l'ampoule, en le lisant depuis l'extrémité arrondie du tube. Il convient d'ouvrir l'ampoule avec précaution car le contenant est sous vide.

  1. Pour ouvrir les ampoules par cassage:

  • Nettoyez délicatement l'extérieur de l'ampoule en verre à l'aide d'un désinfectant adapté. À l'aide d'un coupeur de diamant, d'un stylo pointe diamant ou d'une lime à verre, faites une entaille profonde sur toute la circonférence de l'ampoule au milieu du bouchon en coton hydrophile

  • Enveloppez l'ampoule d'une lingette désinfectante. Ajoutez également une couche supplémentaire de papier essuie-tout pour former une protection adaptée, afin d'éviter la pénétration de verre lors du cassage de l'ampoule.  Veillez à porter des gants et des lunettes de protection, ainsi qu'une blouse de laboratoire, et à travailler dans le poste de sécurité microbiologique

  • Cassez l'ampoule enveloppée au niveau de l'entaille

  • Ôtez le papier et la lingette de l'ampoule avec précaution, car ils pourraient contenir des fragments de verre, et jetez-les, ainsi que l'extrémité de l'ampoule, dans une poubelle pour objets tranchants

  • Une fois l'ampoule ouverte, l'air pénétrera et sera filtré par le bouchon. Le bouchon peut être imprégné de culture sèche et doit être jeté. Ne manipulez pas le bouchon directement ; s'il s'est détaché de l'extrémité de l'ampoule, retirez-le avec une pince

  • Passez à l'étape 6 ci-dessous et suivez les instructions de reconstitution du contenu de l'ampoule

 

  1. Pour ouvrir les ampoules à l'aide d'une source de chaleur:

  • Nettoyez délicatement l'extérieur de l'ampoule en verre à l'aide d'un désinfectant adapté. À l'aide d'un coupeur de diamant, d'un stylo pointe diamant ou d'une lime à verre, faites une entaille profonde sur toute la circonférence de l'ampoule au milieu du bouchon en coton hydrophile

  • Chauffez une fine tige en verre ou une pipette capillaire jusqu'à ce que son extrémité devienne incandescente et en fusion, puis appliquez-la rapidement et fermement sur l'entaille, afin de briser l'ampoule. Si seule une petite fissure apparaît, tapotez délicatement sur la fissure pour l'étendre à toute la circonférence

  • Si la première tentative d'ouverture de l'ampoule échoue, répétez la procédure à l'aide d'une nouvelle tige en verre ; le diamètre de l'extrémité en fusion ne doit pas excéder 2 à 3 mm. Si l'ampoule ne s'ouvre toujours pas, laissez-la refroidir quelques minutes. Vérifiez l'entaille et, si besoin, marquez à nouveau l'ampoule pour accentuer l'entaille. Veillez à chauffer correctement la tige en verre ou la pipette utilisée et à l'appliquer rapidement sur l'entaille avant qu'elle ne refroidisse

  • Une fois l'ampoule ouverte, l'air pénétrera et sera filtré par le bouchon. Le bouchon peut être imprégné de culture sèche et doit être jeté. Ne manipulez pas le bouchon directement ; s'il s'est détaché de l'extrémité de l'ampoule, retirez-le avec une pince

  • Passez à l'étape 6 ci-dessous et suivez les instructions de reconstitution du contenu de l'ampoule

 

  1. Reconstitution:

  • À l'aide d'une pipette Pasteur, ajoutez environ 0,5 ml de bouillon (un bouillon nutritif classique peut être utilisé), enrichi en sang si besoin, dans l'ampoule et attendez 5 à 10 minutes que le contenu se réhydrate. Mélangez le contenu avec précaution pour éviter la formation de mousse ou la création d'aérosol

  • Conformément aux exigences en matières de gaz et de croissance, la suspension en bouillon doit être repiquée dans un milieu ou support adapté, de préférence choisi pour inclure un milieu solide, afin d'obtenir des colonies uniques et de détecter des contaminants aériens ayant pu être introduits à l'ouverture de l'ampoule. Veuillez noter que pour les organismes exigeants, nous recommandons d'utiliser la totalité du contenu reconstitué de l'ampoule (0,5 ml) dans un milieu ou support adapté

  • Jetez l'ampoule dans la poubelle pour objets tranchants.

 

French - A Guide for opening of NCTC glass ampoules and reconstitution of freeze dried material NW 5208.01-19

Review date: 07/06/2022